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非變性蛋白電泳Marker轉(zhuǎn)膜問題

http://m.sanguoditan.cn/news_detail.aspx?NewsID=248

非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（45-880 kD）

Native Electrophoresis Protein Marker（45-880 kD）

●產(chǎn)品編號及規(guī)格：

RTD6137   20次 100 μl

●儲存及運輸條件：

-20℃保存，濕冰運輸，有效期為12個月。

● 產(chǎn)品簡介：

    本產(chǎn)品有4種蛋白組成，分子量范圍為45-880 kD，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍染色后可以得到5條主帶。

● 使用說明：

1. 取出產(chǎn)品后，常溫融化后，徹底混勻，上樣電泳。

注：上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請適當(dāng)調(diào)整上樣量。

2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：RTD6130）或者蛋白預(yù)制膠（貨號RTD6118）。如自備試劑，經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進行非變性電泳。

3. 電泳條件：

建議使用8%非變性等度膠或者4-15%非變性梯度膠進行電泳。

4. 電泳結(jié)束后，考馬斯亮藍染色，觀察結(jié)果。

注：使用銀染染色時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法，需要適當(dāng)降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。

注意：

1.本蛋白Marker不適用于變性蛋白電泳(SDS-PAGE)。
2. 蛋白非變性電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小。因為在非變性條件下，蛋白的電荷，空間結(jié)構(gòu)，物化性質(zhì)等都對蛋白的遷移有影響。
3.非變性蛋白電泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然結(jié)構(gòu)，都沒有偶聯(lián)染料，在電泳時基本都看不到條帶；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見淡黃色，其中440 kD顏色更深。凝膠轉(zhuǎn)膜后，膜上也可以看到黃色的440 kD條帶，可以大體判斷Marker轉(zhuǎn)膜的效果。
4. 非變性Marker轉(zhuǎn)膜后可以后用麗春紅染色液（貨號：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測轉(zhuǎn)膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。

使用RTD6137非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（45-880 kD）產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella

Author: Xin?Yan Geng,Hui?Juan Jin, Lan Xia.Bin?Bin Wang,Su?Ren Chen

Marker: RTD6137非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（45-880 kD）

Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024) 81:118 

Institution: Beijing Normal University

Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3